本标准适用于含乳饮料及其原料中酪蛋白总含量的测定，不适用于发酵法、酶解法、水解法等工艺对蛋白质改性的样品。
一、原理
试样溶液中的酪蛋白采用等电点沉淀后复溶，用胰蛋白酶进行酶解，同时加入同位素内标，C18水相柱分离，采用液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量。
二、试剂
1、浓盐酸 ( HCl )。
2、甲酸 ( CH2O2 )：质谱级。
3、醋酸 ( CH3COOH )：色谱级。
4、氯化钠 ( NaCl )。
5、乙腈 ( CH3CN )：质谱级。
6、三羟甲基氨基甲烷 ( Tris，C4H11NO3 )。
7、聚乙二醇辛基苯基醚 ( Triton X-100, C34H62O11 )。
8、胰蛋白酶 ( Trypsin，C6H15O12P3 )：质谱级，猪源、牛源、基因工程来源均可;建议采用基因工程级的胰蛋白酶以降低杂酶的影响。
三、仪器和设备
1、高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。
2、酶标仪。
3、分析天平：感量分别为0.001 g、0.000 1 g和0.000 01 g。
4、低温离心机：转速≥6 000 r/min。
5、恒温水浴锅或可控温培养箱。
6、pH计。
7、涡旋振荡器。
四、试样蛋白提取
含乳饮料固体试样 ( 若含乳包装为独立包装，应与其他调味粉末混合后取样，例如：咖啡、奶茶等饮品 )：试样称取1 g～5 g ( 准确至0.001 g ) 于锥形瓶中；若为乳饮料液体试样：精密量取试样10 mL 于锥形瓶中，加入30 mL 预温 ( 40℃ ) 的Tris-HCl溶液 ( 3.2.5 ) ，混匀后，放入60℃水浴恒温振荡1 h，取出冷却后用Tris-HCl溶液 ( 3.2.5 ) 转移定容至50 mL容量瓶 ( V溶解体积 ) 。
五、试样的稀释
为保证该实验在蕞佳的酶解效率下进行，需根据试样中总蛋白的含量测定结果 ( 5.3 ) , 用Tris-HCl溶液 ( 3.2.5 ) 对复溶后的试样溶液进行稀释 ( f3稀释倍数 ) ，使试样稀释液中的总蛋白含量保持在0.2 mg/mL~0.7 mg/mL之间。
附件： 含乳饮料及其乳原料中酪蛋白含量的测定（ BJS 201915 ）
