高效液相色谱仪测定发酵食品中有机酸

高效液相色谱仪测定发酵食品中有机酸

日期:2021-8-20

依据国标GB T32098-2015对生物发酵法中有机酸的分类,单羧酸和二元羧酸在发酵食品中普遍存在。本文采用液相色谱仪以及复合模式色谱柱对发酵食品中4种单羧酸进行分离,流动相中未添加离子对试剂,也没有使用高水相体系,配合 WAX-1色谱柱,提高了4种有机酸的分离和保留。4种有机酸在其适宜的浓度范围内线性关系良好(10-1000ug/mL,r-2=0.9999),LOD在1.1~1.4μg/mL之间,LOQ在4~5μg/mL之间,均能满足发酵食品中单羧酸的检测要求。

【仪器/耗材清单】

1.1 仪器:高效液相色谱仪LC-5000型,配置紫外检测器,分析天平,离心机,组织捣碎机,研钵,三角瓶,水浴锅,过滤器

1.2 WAX-1色谱柱(250mm×4.6mm,5um)

【实验/设备条件】

2.1 乙腈(色谱纯,美国Thermo Fisher公司);实验用水为Milli-Q去离子水;磷酸二氢钾(美国Thermo Fisher公司Arcos品牌,色谱纯,99%) 磷酸(国药集团,分析纯)

2.2 测试用标准品:甲酸(LCMS纯,美国Thermo Fisher公司)乙酸(LCMS纯,美国Thermo Fisher公司);乳酸(食品级,95%,客户提供),丁酸(色谱级,客户提供)

2.3 色谱条件

色谱柱:Thermo Acclaim Mixed-Mode WAX-1(250mm×4.6mm,5um)

柱温:30 ℃;

进样量:10 μL;

流速:0.8ml/min;

检测波长:UV210nm;

流动相:乙腈:25mmol磷酸二氢钾(磷酸调PH3.93)(40:60),等度洗脱。

【样品提取】

3. 1 储备液:分别精确称取四种有机酸适量,水溶解,配制储备液 1000 μg/mL。

3.2 系列标准曲线:水溶剂,配制系列标准溶液10μg/mL– 1000μg/mL

3.3 供试品:精密称取酸奶1.2g,加8mL水,振摇1min,定容到10mL,4500r/m离心10min,过滤,取续滤液作为上机溶液。精密称取固体酵素1g,加8mL水,振摇1min,定容到10mL,4500r/m离心10min,过滤,取续滤液作为上机溶液。

【实验/操作方法】

4.1 重复性测试

采用上述仪器分析方法,4种单羧酸在20分钟内均可获得良好的色谱峰,分离效果良好。图1为四种有机酸200ppm浓度色谱图,各峰面积及保留时间RSD%值均小于0.6%,其中各化合物测试结果见表2。

4.2 线性范围测试

采用上述仪器分析方法,对4种有机酸进行线性范围测试,线性相关系数r2均大于0.999,线性关系良好。4种有机酸线性范围、线性相关系数、LOD(S/N>3)及LOQ(S/N>10)结果见表2,化合物线性方程图见图2。

4.3 样品测试

对市售的发酵酸奶和固体酵素饮料进行有机酸检测,乳酸均检出,其他干扰物与乳酸及其他几种有机酸位置互不影响。

【实验结果/结论】

4.1 WAX-1色谱柱独特的复合模式键合相,同时兼具反相和弱阴离子交换两种交换模式,此方法报告中4种有机酸主要通过离子交换模式进行保留,相比C18而言,具有不需要高水相,不需要添加离子对试剂的优势。方法重复性良好,4种有机酸在10-1000ppm范围内线性关系良好,高浓度有机酸峰形尖锐对称。

4.2 本方法非常适合用于发酵食品中单羧酸的检测。

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