用棒状薄层色谱仪(TLC-FID)分析饲料中的脂类

用棒状薄层色谱仪(TLC-FID)分析饲料中的脂类

日期:2019-10-23

脂类在有机体内具有重要的营养和生理作用。脂类是有机体的能量储存物质,为有机体提供必需脂肪酸;同时,脂类也是脂溶性维生素的载体,是构成生物膜的重要物质,它与细胞的识别、种特异性和组织免疫等密切相关。其中,胆固醇是构成有机体的结构成分之一,参与形成细胞膜,是合成胆汁酸、维生素D以及甾体激素的原料。当动物摄入的胆固醇过低时,易造成贫血,降低机体的抵抗力。甘油酯分甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)和甘油一酯(MG)。近年来发现DG具有多种生物学功能,比如饲料中DG具有减少内脏脂肪、抑制体重过分增加、降低血脂的作用,因而受到广泛关注。TG在机体内也是含量最多的脂类,大部分组织均可以利用TG分解产物供给能量,同时肝脏、脂肪等组织还可以进行TG的生物合成,在脂肪组织中贮存。磷脂(PL)是含有磷脂根的类脂化合物,是生命的基础物质。而细胞膜就是由70%左右的蛋白质和30%左右的PL构成,主要由卵磷脂、脑磷脂等组成。PL对活化细胞、安神、调节内分泌、增强免疫力起着重要的作用。

由此可见,酯类对养殖动物是非常重要的。了解饲料中脂类成分对于指导我们进行合理的设计饲料配方具有重要意义。过去酯类分析常采用薄层色谱法或高效液相色谱法,前者无法进行定量分析,后者不仅费时而且试验过程复杂。润扬仪器公司把薄层色谱扫描仪运用到饲料粗脂肪中酯类分析旨在为饲料中酯类的分析找到一种切实可行的方法。棒状薄层色谱扫描仪TLC-FID(润扬仪器公司RY-CF19棒状薄层色谱仪)是分析酯类成分的一种新型仪器,可对已在薄层色谱上分离并由氢火焰离子系统检测到的各种化合物进行定性和定量分析。在国外,棒状薄层色谱仪已被广泛运用于食品科学和营养学中脂类成分的分离、定性和定量。

酯类分析首先要获得粗脂肪。动物组织中粗脂肪提取普遍采用国际标准的脂肪提取法,即Folch法,也就是用氯仿:甲醇=2:1的溶液对动物组织脂肪进行提取。饲料中粗脂肪普遍采用索氏提取法。因此,本试验采用三种方法对饲料中粗脂肪进行提取。分别是Folch法、索氏提取法和乙醚提取法,每种方法做3个平行,用Spss13.0进行显著性检测。观测3种方法之间提取效果的差异,通过对比优化本实验决定用于脂类分析粗脂肪采用乙醚提取方法,比较简单,耗时也少。

乙醚浸提法。将干重1g或湿重2g的饲料样品装入35ml的比色管中,然后加入20倍的乙醚,在室温下浸提24小时后用滤纸过滤,在真空干燥器内抽真空除掉乙醚。若脂肪含量已知,饲料样品用乙醚浸提5至10分钟即可,用滤纸过滤后即可上机测定。

抽提用饲料是本实验室用鱼油自制的一种河蟹饲料。

用棒状薄层分析仪分析酯类时要求粗脂肪含量在10~20mg/ml。按此要求对获得的粗脂肪进行稀释,然后点样到色谱棒上,在正己烷:乙醚:甲酸=42:28:0.3展开液中展开10cm,烘干后用润扬RY-CF19棒状薄层分析仪进行分析。

参数设置:空气流量1800~2000ml/min,氢气流量160ml/min,棒状薄层色谱仪扫描速度30秒。

润扬仪器总结:脂类分析只是对常规营养成分进行分析,分析的项目主要是粗蛋白、粗脂肪、总糖、灰分、氮、磷等,氨基酸和脂肪酸分析大多应用于科研上,生产上很少去分析他们,脂类分析更是少之又少,但是脂类如磷脂在饲料中添加已经有很多报道,其促进水产动物生长发育的作用和改善肉质的效果明显。所以,进行酯类分析对我们了解饲料中酯类种类和含量是非常必要的,可以更好地指导我们设计合理的饲料配方,从更深营养层面进行研究,为动物营养研究增添新的内容。

用棒状薄层色谱仪(TLC-FID)分析饲料中的脂类

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