目前，染发剂在全世界受到越来越多的消费者的欢迎，但是染发剂中可能含有一些化学成分，其对人体健康将产生威胁。近年来，很多研究报道，这些化学成分可能会穿透过人的皮肤和头发，甚至留在人体内数年，进而可能引发皮肤破损、癌症和基因毒性等很多不良反应。因此，对染发剂中这一类化学成分禁止和限制使用就显得尤为必要。
润扬仪器建立的染发剂中32种禁限用物质的液相色谱仪检测方法可以作为食品药品监督颁布方法的补充版。同以往很多方法相比，该方法大大简化了检测过程，有效改进了同分异构体或者结构类似物的分离度。应用该方法，在简单的反相梯度洗脱过程中，32种禁限用化学成分得到了很好的分离分析，整个分析过程简单且重复性好。在染发剂及其他相关领域，该方法都具有较强的实用性，可以推广应用于各种检测工作中，使检测工作更加简单、标准、可靠。
适用范围
本方案适用于化妆品染发剂中32种禁限用染料的检测。
标准溶液的配置
单标储备液：准确称取各待测化学成分标准品50 mg ( 准确至0.1 mg ) ，置于10 mL容量瓶中，用甲醇-2 g/L亚硫酸氢钠水溶液 ( 1:1 v/v ) 的混合溶液溶解并定容，分别制成5 mg/mL的单标储备液。部分标准品在上述混合溶液中溶解性较差，采取的措施如下：甲苯-2,5-二胺硫酸盐和2-氯-p-苯二胺硫酸盐用2 g/L亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容，浓度均为5 mg/mL；甲苯-3,4-二胺和4-硝基-o-苯二胺用甲醇溶解并定容，浓度均为5 mg/mL；2-硝基-p-苯二胺用无水乙醇溶解并定容，浓度为2.5 mg/mL。所有单标储备液需保存在-20 ℃的冰箱中，保存期限为1个月。
混合标准溶液：将32种待测化学成分分为两组，分别准确移取单标储备液适量置容量瓶中，用2 g/L亚硫酸氢钠水溶液定容至刻度，配制成目标浓度的混合标准溶液，同样保存在-20 ℃的冰箱中，保存期限为1个月。可根据需要对此混合标准溶液继续稀释，配制成系列浓度的混合标准工作溶液，现用现配。
色谱条件
仪器: LC-3000U液相色谱仪（润扬仪器），配紫外检测器
色谱柱: Spursil® C18, 250 x 4.6 mm,3 μm
流速: 1.0 mL/min
进样量: 5 μL
柱温: 35 ℃
检测器: UV 280 nm
流动相Ⅰ: 40 mM磷酸二氢钾(pH 2.8) + 10 mM辛烷磺酸钠缓冲液 (A)-乙腈+甲醇(40+60)(B)
梯度设置
流动相Ⅱ: 40 mM磷酸二氢钾(pH 2.8) + 10 mM辛烷磺酸钠缓冲液(A)-乙腈(B)
梯度设置
检测结果
图1. 21种待测化学成分的混合标准溶液色谱图
（流动相I）
表1. 21种待测化学成分的检测结果
图2. 11种待测化学成分的混合标准溶液色谱图
（流动相II）
表2. 11种待测化学成分的检测结果
如上，32种化学成分被分为两组，这两组待测物均在Spursil® C18色谱柱上得到了很好的分离（见图1和图2），其洗脱顺序、保留时间、分离度和不对称因子如表1和表2所示。几乎所有待测物的色谱峰与相邻峰都达到了基线分离，分离度为1.25以上。除了２-甲基间苯二酚、苯甲基吡唑啉酮和2-氨基-3-羟基吡啶（不对称因子小于1.5）以外，其余待测物的峰形都几乎全对称，不对称因子为0.85～1.16。
应用Spursil® C18色谱柱建立了染发剂中32种禁限用化学成分的检测方法。同文献报道和官方颁布的方法相比，该方法更加简便，适于实验室日常检测使用。应用该方法，全部32种禁限用化学成分可以得到快速、有效的分离检测，故而可以为实验人员节省大量的时间，并使得检测工作更加顺利，检测结果更加可靠。
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