RY-CF19棒状薄层色谱扫描仪在脂类分析中的应用

RY-CF19棒状薄层色谱扫描仪在脂类分析中的应用

日期:2019-10-24

棒状薄层色谱扫描仪是将薄层色谱分离 ( TLC) 技术与氢火焰离子检测器 ( FID) 技术结合起来的一种组成分析仪器。TLC/FID 技术源于 1976 年英国的 Padley发明的棒状薄层色谱氢火焰扫描法, 随后日本的雅特隆公司生产了 TH- 10 型棒状薄层色谱扫描仪,我国也于2000年后有所生产,如RY-CF19型棒状薄层色谱仪,它取代了传统的吸附柱色谱法, 使组成分析实现了微量化、快速化、仪器化。它用表面涂有硅胶的石英棒代替了长的玻璃吸附柱进行分离, 用氢火焰离子化检测器代替了高效液相色谱 ( HPLC) 的紫外、示差折光检测器进行检测, 既克服了气相色谱 ( GC) 不能分离难挥发组分的缺点,又解决了高效液相色谱 ( HPLC) 定量困难的问题。

棒状薄层色谱扫描仪是分析食物中脂类成分的有力工具, 是一种快速、准确、简便、试样用量少的好方法。脂类分析常采用薄层色谱法 ( TLC) 或高效液相色谱 ( HPLC) 法, 前者无法定量, 后者费时, 试验过程复杂。

棒状薄层色谱扫描仪 ( Iatroscan TLC/FID) 是一种自动检测器, 可对已在薄层色谱 ( TLC) 上分离并由氢火焰离子系统 ( FID) 检测到的各种已知化合物进行定量分析。在国外它已被广泛用于食品科学和营养学中脂类成分的分离、定性和定量。润扬RY-CF19棒状薄层色谱仪用于分析食物中脂类成分, 操作简便、快捷、试样用量少、重复性好。

在色谱棒薄层吸附色谱中, 吸附剂一般是极性的,如硅胶、氧化铝等。混合物的分离是基于吸附剂、被分离物质和展开剂的极性不同而发生的。展开剂在色谱棒的毛细管中向前移动,点在棒上的样品就不同程度地随着展开剂的移动而移动。但因其极性有差异,故不同化合物与吸附剂和展开剂亲和力不同, 从而各化合物在色谱棒上移动距离不一样, 与吸附剂亲和力强的组分留在接近原点处,反之,亲和力弱的组分则随着展开剂移动,亲和力愈弱,移动距离愈远,愈接近展开剂前沿。

棒状薄层色谱扫描仪分析样品前,将稀释过的样品试液点在专用的色谱棒上,经合适溶剂展开使样品在色谱棒上得到有效分离。展开剂除去后将此色谱棒通过适当的机械传动装置,水平地穿过检测氢火焰的中心,使化合物燃烧裂解,形成离子碎片和自由电子,所产生的离子被加载在正负极之间,由于在 FID 电极上加载有电场,燃烧器为正极,收集器为负极,所以负离子向燃烧器一边移动,而正离子则向集电极一边移动。这些在燃烧器和集电极之间的离子电流与在氢火焰中被离子化的各组分相对应,产生与化合物量成正比的电流信号,从而可从最后得到的图中读出被分离的物质。

1 总脂的提取

1.1 抽提

总脂的提取采用国际通用的标准脂肪提取法即氯仿- 甲醇 ( 2∶1 V/V) 法。提取总脂时, 样品鲜样 5 g 左右或干样1 g 左右 ( 称取的样品量以含总脂 0.1 g 为准) ,放入 25 mL 比色管中 ( 试管、广口瓶等均可) , 加入 20mL 氯仿- 甲醇 ( 2∶1V∶V)混合 溶液,在室温下抽提 24 h, 期间摇动 2~3 次, 使脂肪抽提完全。

1.2 过滤

用抽滤瓶接真空泵抽滤。定性滤纸对折两次, 展开成圆锥形, 放入三角漏斗中, 用氯仿润湿滤纸, 把抽提液倒入漏斗中抽滤, 用氯仿洗涤两次滤渣即可。

滤液转入另外已经洗净、烘干、称重并且贴有标签的比色管中 ( 试管、离心管等均可) 。

1.3 分离

滤液加入 5 mL 0.03M 的 MgSO4 溶液, 混匀后室温下静置 4 h 左右, 使上下两相液体澄清, 然后用吸管把上层溶液吸掉, 注意把两相之间的白色物质吸干净。

1.4 真空干燥

将上述比色管放入真空干燥器中, 接真空泵抽真空, 使溶剂 ( 氯仿) 蒸干, 约 24 h 后可称重。注意在开始抽真空时不可过快, 以防止比色管中的氯仿喷溅。

1.5 计算

比色管两次称重之差为总脂含量, 总脂除以样品质量则得到样品总脂含量的百分比。把总脂用氯仿溶解后转移到 1.5 mL 离心管中, 放在冰柜中保存备用。

2 脂类分析

2.1 总脂的稀释

用RY-CF19棒状薄层分析仪分析脂类时要求总脂含量在 10~20 mg/mL 之间。若总脂含量过少, 则峰值低, 分辨率也低, 影响测量精度; 若总脂含量大, 则峰值过高,

会产生波形失真, 同样会影响分析结果的精度。

2.2 展开液

用棒状暴层色谱扫描仪分析脂类时, 首先要知道在同一条件下标准品的出峰位置和保留时间, 样品的出峰位置及保留时间和标准品的比对才能知道所分析

样品的脂类种类。分离样品脂类时, 应选择合适的展开液配方。

下面介绍两种展开液配方。配方 1∶正己烷∶乙醚:甲酸=42∶28∶0.3, 一次展开, 展开 10 cm, 可分离中性脂, 但不能分离极性脂; 配方 2∶氯仿∶甲醇∶水=50∶20∶2.5, 展开 5 cm, 干燥后再用正己烷∶乙醚∶甲酸=65∶5∶0.15, 第二次展开, 展开 10 cm, 主要是分离极性脂。这两种展开液的标准品图谱如图 1 和图 2 所示, 供样品分析时参考。

2.3 色谱棒的活化

活化过程就是色谱棒在扫描仪上进行空白扫描,把色谱棒上有机杂质在氢火焰的作用下离子化,,防止对样品产生干扰信号。活化后的色谱棒在不点样的情况下, 进行标准扫描, 扫描基线是一条直线。

2.4 点样

稀释后的待测样品可用微量点样器点样, 在色谱棒上点样宽度要求不超过 1 mm, 点样量为 1 μL。点样时分4 ~5 次 点 在 色 谱 棒 上 , 这 样 可 保 证 点 样 宽度 不 超 过 1 mm。 10 根 色 谱 棒 固 定 在 色 谱 棒 架 上 ,点 样 时 把 色 谱 棒 架放在点样板上, 在 0 刻度线处点样。

2.5 展开

点样完成后, 把色谱架放入展开缸内展开, 展开液沿着色谱棒向上移动, 到刻度 10 处停止。取出后在60℃条件下烘干 5min。

2.6 扫描

把色谱架放在RY-CF19棒状薄层色谱仪的扫描架上, 仪器和电脑专用扫描软件联机后, 用标准扫描进行扫描即可。扫描图谱和标准品图谱比对, 就可知道样品中的脂类组成。

版权所有:http://www.runyangyiqi.com 转载请注明出处
13356323915 发送短信