酊剂中乙醇含量的气相色谱仪测定

酊剂中乙醇含量的气相色谱仪测定

日期:2022-12-18

酊剂的制备一般采用乙醇为溶剂而成。由于制剂中含乙醇量的高低对于制剂中有效成分的含量、所含杂质的类型和数量以及制剂的稳定性等都有影响,所以《中国药典》规定对该类酊剂需做乙醇检测。

乙醇具有挥发性特点,药典通则0711乙醇量测定法,采用气相色谱仪(通则0521)测定各种含乙醇制剂中在20℃时乙醇的含量(%/%)(ml/ml)。因酊剂中所有组分并非能全部出峰,故采用内标法定量测定。

氢焰检测器(FID)是GC中常用的一种高灵敏度检测器,是通过测定有机物在氢焰作用下化学电离形成的离子流强度进行检测的。其特点是只对含碳化合物有明显响应,而对非烃类、惰性气体或在火焰中难电离或不电离的物质,则讯号较低或无信号。H2O是FID不敏感物质,故FID对本实验中待测乙醇、丙醇有响应,而无水峰。因此,FID特别适用于含水样品中微量有机组分的测定。

仪器设备与试剂

1.仪器

气相色谱仪GC-2020氢火焰离子检测器(润扬仪器);AHS-16型自动顶空进样器;毛细管色谱OV-1301:30m×0.53mm×3.00um;N2000色谱工作站;RYH-300高纯氢气发生器;RYA-2000空气发生器;40升氮气钢瓶(含减压阀);电脑及打印机。

2.试剂

内标物:正丁醇;无水乙醇(色谱纯或分析纯);蒸馏水;酊剂待检试样。

测定方法及步骤

1.  色谱条件与系统适用性试验

采用(6%)氰丙基苯基-(94%)二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱;起始温度为40℃,维持2分钟,以每分钟3℃的速率升温至65℃,再以每分钟25℃的速率升温至200℃,维持10分钟;进样口温度200℃;检测器(FID)温度220℃;采用顶空分流进样,分流比为1:1;顶空瓶平衡温度为85℃,平衡时间为20分钟。理论板数按乙醇峰计算应不低于10000,乙醇峰与正丙醇峰的分离度应大于2.0。

2.  校正因子测定

精密量取恒温至20℃的无水乙醇5ml,平行两份;置100ml量瓶中,精密加入恒温至20℃的正丙醇(内标物质)5ml,用水稀释至刻度,摇匀,精密量取该溶液1ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀(必要时可进一步稀释),作为对照品溶液。精密量取3ml,置10ml顶空进样瓶中,密封,顶空进样,每份对照品溶液进样3次,测定峰面积,计算平均校正因子,所得校正因子的相对标准偏差不得大于2.0%。

3.  测定法

精密量取恒温至20℃的供试品适量(相当于乙醇约5ml),置100ml量瓶中,精密加入恒温至20℃的正丙醇5ml,用水稀释至刻度,摇匀,精密量取该溶液1ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀(必要时可进一步稀释),作为供试品溶液。精密量取3ml,置10ml顶空进样瓶中,密封,顶空进样,测定峰面积,按内标法以峰面积计算,即得。

许多有机化合物的校正因子未知,此时可采用内标对比法进行定量。该法是在不知校正因子时内标法的一种应用。先配制已知浓度的标准溶液,将一定量的内标物加入其中,再按相同比例将内标物加入未知浓度的试样中。分别进样,由下式可求出试样中待测组分的含量:

酊剂中乙醇含量的气相色谱仪测定酊剂中乙醇含量的气相色谱仪测定

式中,c%为待测组分的浓度;A、A分别为被测组分和内标物的峰面积。

4.  注意事项

(1)FID属于质量型检测器,其响应值(峰高h)取决于单位时间内引入检测器的组分质量。当进样量一定时,峰面积与载气流速无关,但峰高与载气流速成正比,因此当用峰高定量时应保持载气流速恒定。但在内标对比法中由于所测参数为组分峰响应值之比(即相对响应值),故以峰高定量时载气流速的变化对测定结果影响小。

(2)采用内标对比法定量时,最好考虑内标工作曲线(以对照液中组分与内标峰响应值之比作纵坐标、以对照液浓度为横坐标作图),若已知工作曲线通过原点且在其线性范围内时,再采用内标对比法定量;同时对照液的浓度应与样品溶液中待测组分的浓度尽量接近,这样可以提高测定准确度。氢气是一种危险气体,实验过程中一定要按要求操作,而且色谱实验室要有良好的通风设备。

附相关知识内标法只要求被测组分与内标物产生信号即可定量,很适合于中药及复方制剂、酊剂中有效成分的含量测定。内标物应符合下列要求:

①是试样中不含有的组分;

②是稳定的纯品,能与试样互溶,但不发生化学反应;

③与试样组分的色谱峰分离完全,并尽量靠近;

④内标物的量应尽量接近被测组分。故该实验选用正丙醇作为内标物。

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