在检验检测实验室里，气相色谱、液相色谱、质谱仪堪称“分离分析三巨头”——从食品中农残检测到环境污染物筛查，从医药成分分析到材料表征，它们都是不可或缺的核心设备。但想要用好这些仪器、读懂分析结果，扎实的基础概念是关键。为此，系统汇总色谱分析常用的104个核心概念，涵盖气相、液相、质谱全领域，帮你夯实理论根基。《高效液相色谱法》作为第三部分，供大家参考交流。
1. 液相色谱相对气相色谱的优点
不受样品挥发性、热稳定性及相对分子质量限制，只需制成溶液即可；适用于生物大分子、离子型化合物、不稳定天然产物及高分子化合物；流动相不仅起运载作用，还与固定相共同与样品作用，为分离条件优化提供额外可变因素（气相色谱流动相为惰性气体，仅起运载作用）。
2. 液相色谱特点
高压、高速、高效、高灵敏度；适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的分离分析。
3. 高效液相色谱仪的组成
高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、数据处理系统。
4. 流动相脱气方法
流动相使用前必须脱气，常用方法：低压脱气法（电磁搅拌+水泵抽空，可加热或吹氮气）、吹氦气脱气法、超声波脱气法。
5. 梯度洗脱
用两种（或多种）不同极性溶剂，在分离过程中按程序连续改变流动相配比和极性，通过极性变化改变分离因素，提高分离效果。
6. 梯度洗脱类型
● 高压梯度（内梯度）：先加压后混合；溶剂经高压泵增压后进入梯度混合室，混合后送入色谱柱；
● 低压梯度（外梯度）：先混合后加压；常压下按程序混合溶剂后，再用泵输入色谱柱。
7. 进样系统要求
良好密封性、最小死体积、高稳定性；进样时对系统压力和流量影响小。
8. 分离系统
色谱柱是分离核心（柱管+固定相）；
● 柱管为直型不锈钢管（常规柱长530cm、内径45mm；凝胶色谱柱内径3~12mm；制备柱内径可达25mm）；
● 淋洗溶剂进入分离柱前需通过前置柱；
● 填料粒径3~10μm，填充采用匀浆法；
● 发展趋势：减小填料粒度和柱径以提高柱效。
9. 检测系统
作用：连续监测分离后流出物的组成和含量变化；
类型：紫外-可见吸收检测器、光电二极管阵列检测器、示差折光检测器、荧光检测器、电化学检测器。
10. 流动相的要求
● 不与色谱柱发生不可逆化学变化（保持柱效和保留性质）；
● 对待测样品有足够溶解能力；
● 与检测器匹配；
● 粘度小（提高柱效）；
● 纯度高、价格便宜、毒性小。
11. 固定相的分类
● （1）按承受压力分：
● 刚性固体：以二氧化硅为基质，耐高压，表面可键合功能基团（键合固定相，应用最广）；
● 硬胶：聚苯乙烯-二乙烯基苯交联而成，耐压力低，用于离子交换色谱和凝胶色谱。
● （2）按孔隙深度分：
● 表面多孔型：玻璃珠表面涂覆多孔活性物质；优点：快速分离、填充均匀、机械强度高、耐高压；缺点：多孔层薄、进样量受限；适用于简单样品常规分析；
● 全多孔型：硅胶颗粒聚集而成，比表面积大、柱容量大；小颗粒全孔型固定相孔洞浅、传质快、柱效高；适用于复杂样品、痕量组分分析，应用最广。
12. 液固吸附色谱法原理
以固体吸附剂为固定相，试样分子与流动相溶剂分子在吸附剂表面竞争吸附；分离过程是吸附-解吸的平衡过程。
13. 液固吸附色谱法的固定相、流动相及应用
● 固定相：常用硅胶、氧化铝、活性炭（硅胶最常用）；
● 流动相：极性大试样用强极性洗脱剂，极性弱试样用弱极性洗脱剂；
● 应用：几何异构体分离、族分离（如农药异构体、石油中烷/烯/芳烃分离）；不适用于强极性离子型样品及同系物分离。
14. 液液分配色谱法原理
根据物质在两种互不相溶（或部分互溶）液体中溶解度不同实现分离；分配系数大的组分保留值大。
15. 液液分配色谱法的流动相、固定相及应用
流动相：与固定液互溶度小，极性差异越大越好；
● 正相分配色谱：流动相极性＜固定相极性，极性小的组分先流出；适用于强极性和中等极性组分；
● 反相分配色谱：流动相极性＞固定相极性，极性大的组分先流出；适用于非极性或弱极性组分；
● 固定相：载体+固定液（常用b,b’-氧二丙腈、聚乙二醇、聚酰胺、正十八烷、角鲨烷等）；
● 应用：同系物分离（如氨基酸、脂肪酸同系物）。
16. 化学键合固定相
利用化学反应将有机分子键合到载体表面，形成均一、牢固的单分子薄层，构成不同性能的固定相。
17. 化学键合固定相的特点
● 固定相不易流失，柱稳定性和寿命高；
● 耐受多种溶剂，可用于梯度洗脱；
● 表面均一、无液坑，传质快、柱效高；
● 可键合不同基团改变选择性（如氰基、氨基用于正相色谱，离子交换基团用于离子色谱，烷基、苯基用于反相色谱）；是HPLC理想固定相。
18. 离子交换色谱法原理
固定相为离子交换树脂，流动相为水溶液；利用待测样品中各组分离子与树脂亲和力不同实现分离。
19. 离子交换色谱法的流动相及应用
流动相：水的缓冲溶液（阴离子树脂用酸性水溶液，阳离子树脂用碱性水溶液）；
应用：离子及可离解化合物（如氨基酸、核酸）。
20. 凝胶色谱法原理
固定相为多孔性凝胶，流动相为水溶液或有机溶剂；根据组分分子体积大小分离：小分子可扩散到凝胶空隙（出峰最慢），中等分子部分通过空隙（中速），大分子被排斥（出峰最快）；溶剂分子最小，最后出峰；可分离相对分子质量100-10⁵的化合物。
21. 凝胶色谱法的流动相
需满足：能溶解样品、与凝胶相似（润湿凝胶防吸附）、粘度小（增加扩散速度）；常用四氢呋喃、苯、氯仿、水等。
22. 影响分离的因素与提高柱效的途径
（1）液体粘度比气体大100倍、密度大1000倍左右，降低传质阻力是提高柱效的主要途径；
（2）降低固定相粒度可提高柱效；
（3）不可通过升温改善传质；
（4）改变淋洗液组成和极性是改善分离的直接因素；
（5）流速＞0.5cm/s时，H-u曲线斜率小；降低流速对柱效提升有限，但流量是调整分离度和出峰时间的重要参数；
（6）气相色谱固定液原则上可用于液相色谱，但HPLC分离柱制备技术要求高，一般不自行制备。
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