润扬仪器 | 高效液相色谱柱常见问题(一)

润扬仪器 | 高效液相色谱柱常见问题(一)

日期:2020-6-3

色谱柱是各种色谱分析仪器的重要配件,充分了解色谱柱有助于我们更好的使用色谱仪。同时,也可延长色谱柱使用寿命和保持良好的分离效果。

1、色谱柱的柱子是否可以反冲?什么样的柱子可以反冲,什么不可以?反冲后是正着用,还是反着用?

一般的正相反相柱应该都能反冲,只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲,不过目前这样的柱子已经比较少见。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉,反冲后还是正着用比较好,以免柱子的两头都被污染。因此,我们提倡正向使用,反向冲洗。

2、拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做?

新柱活化实际上是一个平衡的过程,除了用流动相平衡外,有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡,特别是测定分子量比较高的多肽时。平衡方式即多进几次样品,直到峰面积和保留时间稳定,再进行正式进样测定。如果要加快平衡时间,把前面用来平衡的进样样品浓度加大,或者不等洗脱完成,连续进样多针。

用待测物对新柱平衡,目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和。

3、测定多肽,一般采用什么柱子?

分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定。也可以用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱。

4、氨基柱在进酸性样品时,使用一段时间后,色谱柱效降低,峰形改变,如何恢复?

氨基柱测酸性样品,应该是用氨基柱的HILIC模式。使用后,用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱,冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨。

5、柱子在什么情况下可以清洗筛板呢?

柱头污染了,就取出污染的,再装一些填料。

5、如果色谱柱子取下来放置一段时间,需要做什么保护吗?

对一般的高效液相色谱反相柱,需要在洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵头塞紧柱两头,以免保存溶剂挥发。不需要做特殊的保护。

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