前几章节我们润扬仪器陆续介绍了液相色谱色谱柱常见问题(一、二、三、四),得到众多应用客户的反馈支持,希望继续完善相关普及知识。今天我们继续探讨色谱柱常见问题(五)。大家知道,色谱柱是色谱仪整套中的核心部件,色谱柱出问题会直接影响分析结果的准确性。了解色谱柱常见问题,助您更好的只用色谱仪。
1、拿到C18柱后会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化,目的是什么?
进行该操作,是因为色谱柱到达用户手中的时间长短不一,在存储和运输的过程中,可能存储液有些挥发,低流速的甲醇可以很好的浸润固定相,使键合相很好的伸展。用溶剂平衡好系统后,如果要更快的获得重现的色谱图,可以采取多次进样或者加大进样量的方式,这样用样品将色谱柱中的活化点饱和,就不会出现异常色谱现象的情况。
2、C18柱曾保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?
保存的酸性环境如果不含缓冲盐,只是短期几天保存在酸性流动相中,无需过于担心,但可能减少几天的使用寿命。如果有缓冲盐,保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出,对柱子损伤很大。
3、 新出厂液相色谱柱,保护溶剂一般是什么?怎样进行平衡清洗?
根据柱子类型的不同,保存溶剂一般不一样,具体要看说明书。一般反相柱用甲醇(乙腈)保存,也有用80%左右甲醇浓度的甲醇/水保存的。
平衡清洗时一般用流动相平衡冲洗10-20个柱体积即可。
4、色谱柱的安装有什么技巧吗?
色谱柱安装技巧不多,只要接头和柱头匹配,确实拧紧不漏就可以了,但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。
5、测定多肽样品时,会出现峰前延或峰拖尾的情况,是什么原因呢?
峰前延或拖尾,一般不是色谱柱的问题,应该是样品和色谱柱填料的作用问题。也就是说,如果色谱柱类型选择没错,我们就可以关注色谱条件的选择,如进样量、样品溶剂、流动相组成(包括添加剂)、流动相pH以及柱温。另外测定分子量较大的多肽,用样品老化平衡色谱柱很重要,分子量越大的物质,需要平衡时间越长。
6、三乙胺磷酸盐缓冲液作流动相,柱压越来越高该怎么样解决?
再生柱子,比如对色谱柱进行反冲。