薄层色谱仪色谱斑点的检识与异常斑点处理

薄层色谱仪色谱斑点的检识与异常斑点处理

日期:2019-9-23

薄层色谱仪分析过程中,点样展开是极为关键的一步,一些细节的失误可能造成分析结果的误判。薄层色谱仪点样色谱斑点的检识包括光学检出法和试剂显色法。

光学检出法分三种情况:

化合物本身有色,在日光下可直接观察;

化合物在可见光下没有颜色,但可吸收紫外光并发射更长波长的光而呈现不同颜色的荧光斑点;

在可见紫外光下都不显色,也没有合适显色方法的,可以用荧光薄层板,化合物在紫外灯下可在荧光背景下显示暗斑。这是因为这些化合物减弱了吸附剂中荧光物质的紫外吸收强度,引起荧光猝灭。

试剂显色法包括以下三种:

喷雾显色,将显色剂喷洒于薄层板(硬板)上,根据显色原理不同,可直接显色或加热显色;

浸渍显色;

蒸气显色:如碘蒸气,挥发性的酸、碱,如盐酸、硝酸、浓氨水、乙二胺等;

异常斑点的对策:

1、拖尾

拖尾在薄层中较常见。引起拖尾的原因有以下几点:1.点样过量,由于吸附剂负载样品能力有限,超载的样品被抛在后面,形成拖尾。2.重复点样,重复点样时每次中心未重合,使点样点呈椭圆形,形成拖尾。3.硅胶死吸附大的化合物亦易形成拖尾,如多羟基化合物,有机酸,糖苷等。根据上述原因,浓的样品可以稀释之后再点样;重复点样样品控制手不发抖或者每次点样都控制点在同一位置;加入酸碱等改良剂来减少拖尾现象。

2、 念珠状斑点 

由于化合物斑点之间距离小,相互连接呈念珠状。引起原因有:1)样品成分复杂过多,在短的薄层板上达不到分离效果,彼此重叠。2)重复点样时,中心不重合,形成复斑。3)采取措施:适当增加薄层板的长度或采用二次双向展开;重复点样时,每次点样中心应重合。

3、 Rf值不稳定

重复操作时同一样品Rf值不稳定,时高时低。如下情况导致此现象:1)层析稳定不稳定,特别是使用混合展开系统时,温度不稳定导致展开剂比例变化;2)人为操作不当,吸取或加入展开剂时不迅速,或加入展开剂时未及时将层析缸盖上密封;3)薄层板厚薄不均匀;4)溶剂质量不同。对策:如果用电吹风吹干层析缸时一定待层析缸冷却至室温再展开;养成正确的实验操作习惯;选取厚薄均一的薄层板;选择质量好的溶剂。

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